Инициация пептидной цепи (часть 3)
Затем этот комплекс присоединяется к нативной 40S субъединице в реакции, независимой от АУГ-инициаторного кодона или мРНК, и на этой стадии все компоненты комплекса 40S.эФИ-3, зФИ-2.ГТФ. Мет-тРНКф могут, по-видимому; легко обмениваться со свободными молекулами в клетке. На этом этапе связывания а процессе инициации участвуют все основные полипептидные субъединицы эФИ-2 и эФИ-3, причем роль эФИ-3 заключается, вероятно, в стабилизации связи между трехкомпонентным комплексом и нативной 40S рибосомой.
Связывание мРНК при образовании инициаторного комплекса. Этот этап [рис. 6.3, этап (3)] и все последующие этапы образования 80S комплекса инициации полностью зависят от присутствия в комплексе связанной Мет-тРНКф. Кроме того, для связывания мРНК необходимы три различных фактора инициации, а именно: эФИ-3, эФИ-4А и эФИ-4Б, а также АТФ, Необходимость АТФ для связывания мРНК при образовании инициаторного комплекса была обнаружена у зародышей пшеницы еще до тoгo, как значение этого этапа стало понятным у других эукариот. Роль АТФ, гидролизуемого при присоединении мРНК, неизвестна, однако она может быть связана с энергозависимой транслокацией, соединяющей антикодон Мет-тРНКф, связанной с 40S, с инициаторным кодоном АУГ в мРНК. Помимо инициирующих факторов эФИ-2 и эФИ-3, в зародышах пшеницы был найден эФИ-4Б, полипептид с молекулярной массой 80000. К концу этого этапа образования инициаторного комплекса в клетке существует прединициаторный комплекс 40S субъединица рибосомы. эФИ-3. эФИ-2.ГТФ.Мет-тРНКф.эФИ4.мРНК (рис. 6.3), к которому должна присоединиться 60S субъединица рибосомы. Механизм присоединения рибосом эукариот к инициаторному АУГ-кодону пока детально не исследован, однако возможно, что рибосомы сначала присоединяются к матрице с 5'-стороны от кодирующей последовательности, а затем связываются с АУГ-кодоном инициаторной тРНК.
Присоединение 60S субъединицы рибосомы. Этот этап требует фактора инициации эФИ-5 и включает серию реакций, в результате которых Мет-тРНКф оказывается связанной с "П" участком 60S субъединицы, ГТФ гидролизуется до ГДФ и Фн, а все факторы инициации покидают комплекс [рис. 6.3, этап (4)]. Основная функция связанного ГТФ заключается, по-видимому, в энергозависимом и требующем присутствия эФИ-5 высвобождения эФИ-2 и эФИ-3 перед присоединением 60S субъединицы. После высвобождения этих факторов остающийся комплекс находится в таком состоянии, что при наличии доступных 60S субъединиц образуется функциональный 80S инициаторный комплекс. Если же существуют препятствия для присоединения 60S субъединицы, то дестабилизированный комплекс 40S субъединица рибосомы. Mет-тРНКф мРНК скорее всего диссоциирует.