Новости

В Министерстве сельского хозяйства России прошло обсуждение урегулирования стоимости зерна на внутреннем рынке. Об этом говорится на официальном сайте ведомства.



Обработка земельных участков с помощью гербицидов для борьбы с борщевиком, согласно предварительной информации, будет стоит Московскому региону примерно двадцать три тысячи рублей на каждый гектар. Подобные сведения во время прямого эфира на «Радио 1» озвучил глава сельскохозяйственного Департамента Московского региона Андрей Разин.



Руководитель сельскохозяйственного Департамента Московского региона Андрей Разин стал участником встречи сотрудников органов исполнительной власти с сельскими тружениками области. В ходе мероприятия обговорили важнейшие вопросы, с которыми сталкивается агротехнический комплекс.


Яндекс.Метрика
Метод определения содержания свободных аминокислот и амидов в тканях растений

Контроль азотного питания растений может быть проведен несколькими способами: по его валовому содержанию, по количеству нитратов, аммонийного азота, свободных аминокислот и амидов. Последние формы азота особенно необходимо использовать при контроле питания тех групп растений, корневые системы которых характеризуются высокой восстановительной способностью, что исключает возможность контроля их азотного питания по содержанию нитратов в надземных частях. Кроме того, нередки условия существования растений, когда исключается возможность образования нитратов в почве. Известно, что аминокислоты могут накапливаться в тканях как при прогрессивном этапе азотного обмена, так и регрессивном. Поэтому при контроле питания с помощью этих соединений особенно важно убедиться в здоровом состоянии растений — показателе нормального обмена веществ.
При изменении условий питания изменяется не качественный, а количественный состав свободных аминокислот и амидов, причем наибольшие различия получаются у амидов, дикарбоновых аминокислот, пролина, аланина и γ-аминомасляной кислоты, т. е. соединений с низкими Rf. Это позволяет использовать малые хроматограммы. Нами была уточнена и несколько изменена техника хроматографии на малых хроматограммах, предложенная японским ученым Одзаки для аспарагина в листьях риса. Изучением распределения свободных аминокислот и амидов по органам различных растений нами было установлено, что для этого рода диагностики следует использовать самые молодые, не вполне развернувшиеся листья. Было установлено, что у ряда растений при усилении азотного питания увеличивается не только и не столько содержание одного аспарагина, сколько концентрация многих свободных аминокислот и амидов, что и было положено в основу нашего метода.
Метод определения содержания свободных аминокислот и амидов в тканях растений

Для хроматографирования использовались круглые беззольные плотные фильтры, которые разрезались на шесть сегментов. С одной стороны каждого сегмента надрезалась узкая полоска-фитиль для подачи растворителя на хроматограмму (рис. 3). Камерами служат чашки Нейбауэра, в центре которых помещают небольшой сосуд с растворителем. Края чашки смазаны вазелином; после размещения в ней хроматограмм камера плотно закрывается стеклом. В каждой камере помещаются четыре хроматограммы: три с испытуемыми пробами и одна с образцовым раствором аминокислот («метчиками»), чем обеспечивается лучшая сравнимость хроматограмм с метчиками, находящимися в одних и тех же условиях. Каждая проба растений испытывалась в шестикратной повторности, причем на сегмент с образцовым раствором в каждую из этих повторностей наносились капли разной концентрации согласно принятой шкале, чтобы сравнить одну и ту же пробу со всей шкалой метчиков. Вид камеры дан на рис. 4.
Метод определения содержания свободных аминокислот и амидов в тканях растений

Проба сока молодых листьев наносится следующим образом. В верхний угол сегмента бумаги, положенного на стекло, выдавливается стеклянным пестиком (d = 0,6 см) сок из пучка листьев (в пучке — 5 самых молодых листочков, а для льна — 10 листочков). Размер пятна сока не должен превышать диаметра пестика, так как только в этом случае будет обеспечено одинаковое количество сока на хроматограмме, равное 9,66 мг +0,82 мг, что установлено специальными замерами и тем подтверждены наблюдения М. А. Белоусова и A.Л. Торопкиной. Пятно образцового раствора наносится аналогичным образом. На каждой хроматограмме простым карандашом ставится номер образца.
Сегменты с пробами сока и образцового раствора помещаются в камеры, полоски-фитили которых опускаются в центральный сосуд с растворителем. Камера закрывается стеклом и оставляется на 4 часа. Предложенный Одзаки одночасовый срок для разгона хроматограммы нами был проверен и была доказана его недостаточность. После высушивания на воздухе хроматограммы проявлялись в термостате при 70° С в течение 20—30 мин. до появления четких окрасок.
Проверка показала, что можно разделить во времени нанесение капель сока листьев на сегмент бумаги и хроматографический анализ аминокислот: после нанесения сока на сегмент бумаги каплю следует быстро высушить (например, «феном»). Таким образом подготовленные пробы могут сохраняться более месяца. Это позволяет в течение лета собрать значительное число проб, которые осенью можно прохроматографировать.
Метод определения содержания свободных аминокислот и амидов в тканях растений

Идентификация аминокислот и амидов проводится путем визуального сравнения размеров и интенсивности окраски пятен на испытуемых и образцовых хроматограммах. Чтобы избежать субъективности в оценке цветов и оттенков пятен, была нами использована «шкала цветов» А.С. Бондарцева.
Связь интенсивности окраски и размера пятна с количеством аминокислот и амидов проверялась на шкале образцовых растворов «метчиков» путем измерения планиметром размеров пятен разных концентраций «метчиков». Сопоставление всех этих данных, а также результаты количественных анализов пятен образцовых растворов на больших хроматограммах позволили дать наряду со шкалой в баллах (табл. 15) количественную характеристику этих баллов (табл. 16).
Содержание свободных аминокислот и амидов в самых молодых листьях зависит от фазы развития (с наступлением репродуктивного развития их количества уменьшаются) и особенностей растения: чем интенсивнее, раньше начинается и более длительно проходит образование новых бутонов (например, у гречихи), тем сильнее и быстрее снижается содержание этих соединений в тканях молодых листьев. Эти выводы получены на основании многократных результатов в опытах с удобрениями разных сельскохозяйственных культур. В качестве примера в табл. 17 приведены данные по наиболее биологически разным трем культурам: льну, овсу и гречихе. I срок — начало бутонизации (у овса — выход в трубку), II срок — цветение. Характеристика оптимального азотного питания по содержанию свободных аминокислот в самых молодых листьях для первых двух фаз развития соответствует данным, приведенным в нижних двух строках табл. 15 при полном обеспечении азотным питанием.
Метод определения содержания свободных аминокислот и амидов в тканях растений

Все аминокислоты и амиды с увеличением концентрации образуют более крупные пятна, главным образом сине-фиолетового или красновато-фиолетового цвета. Аспарагин при высоких концентрациях, а иминокислота пролин при всех концентрациях дают желтый оттенок их пятен на хроматограммах, причем пятна аспарагина при высоких концентрациях становятся оранжевыми.
Реактивы. 1. Растворитель для разгона пятен сока на хроматограммах. 0,2%-ный раствор нингидрина в н-бутиловом спирте и 50%-ной уксусной кислоте при соотношении спирта к кислоте как 2:1.
2. Образцовый раствор аминокислот. Смешанный раствор из следующих аминокислот и амидов: аспарагиновой, глютаминовой, пролина, аспарагина и глютамина. 7,5 мг каждой сухой аминокислоты или амида растворяют в 10 мл 10%-ного изопропилового спирта, подкисленного из расчета 10 мл HCl (уд. вес 1,19) на 1 л спирта. Смешивают по 1 мл каждого раствора аминокислот и амидов в пробирке — рабочий раствор. В угол сегмента микропипеткой наносят точно 1 каплю, содержащую 0,05 мл смеси метчиков, в которой содержится по 7,5 у каждой аминокислоты и амида — это шкала № 1. Шкалу № 2 готовят путем нанесения второй капли на первую после высушивания феном первой. Три капли составят № 3, четыре капли — № 4 и пять капель — № 5.
3. Фильтр «синяя лента» диаметром 15 см. Делится на шесть сегментов.


© 2012-2016 Все об агрохимии Все права защищены
При цитировании и использовании любых материалов ссылка на сайт обязательна