Определение форм фосфорных соединений в растениях (часть 1)
Фосфор в клетках растений представлен многочисленными неорганическими и органическими соединениями. Наибольшее значение среди них имеет фосфор нуклеиновых кислот, белков, фосфолипидов, сахарофосфатов, пирофосфатов, аминофосфатов и некоторых других органических и неорганических соединений. Формы фосфорных соединений в растениях определяют при изучении обмена веществ у растений в зависимости от условий минерального, особенно фосфорного, питания. При изучении содержания фосфорнокислых соединений в онтогенезе растений можно получить динамику изменения содержания отдельных фосфорсодержащих органических соединений, в том числе и минеральных его форм, что позволяет судить о направленности процессов обмена веществ.
Метод определения форм фосфорных соединений основан на последовательном выделении с помощью различных растворителей фосфорсодержащих соединений при гидролизе отдельных групп фосфорных соединений и определении содержания фосфора на фотоэлектроколориметре.
Подготовка растений к анализу. Отобранные образцы свежего растительного материала грубо измельчают ножом или ножницами и фиксируют в термостате при температуре 105°С в течение 15 мин (для инактивации ферментов), а затем высушивают до постоянной массы при хорошей вентиляции в термостате при температуре 60-80°С. Высушенные средние пробы растений измельчают на лабораторной мельнице и просеивают через сито с ячейками 1 мм.
В процессе термической обработки свежего растительного материала возможно разложение органических фосфорных соединений с освобождением минерального фосфора и завышением результатов содержания неорганического фосфора. В связи с этим лучшие результаты получают при анализе свежего растительного материала. Вполне удовлетворительные результаты анализа дают при фиксации растительных проб в жидком азоте с последующей их лиофильной сушкой.
Выделение кислоторастворимого фосфора. На аналитических весах берут 0,3-0,5 г тонкоизмельченного сухого растительного материала, состоящего из вегетативных органов растений, 0,5-1 г муки семян или 2-4 г свежего растительного материала, измельченного на терке, а затем в фарфоровой ступке и помещают в центрифужную пробирку емкостью 50 см3 и приливают 20 см3 10%-ной хлорной кислоты. Центрифужные пробирки плотно закрывают каучуковыми пробками, помещают в ящик встряхивателя и взбалтывают в течение 1 ч. Затем пробирки без пробок уравновешивают на специальных центрифужных весах и центрифугируют при 5 тыс. оборотов в минуту в течение 10 мин. Надосадочную жидкость сливают в мерные колбы № 1 на 100 см3, а осадок разбивают стеклянной палочкой, снова заливают 20 см3 раствора трихлоруксусной кислоты, закрывают пробками и экстрагируют в течение 20 мин на встряхивателе. После этого центрифужные пробирки уравновешивают и центрифугируют в прежнем режиме.
