Мокрое озоление растений по методу К. Гинзбург
Принцип метода. В основу метода положены реакции гидролиза и окисления органических веществ растений смесью серной и хлорной кислоты (10 : 1) при нагревании; основным окислителем является хлорная кислота. Безазотистые органические вещества окисляются до воды и углекислоты, высвобождая зольные элементы в виде оксидов. Азотсодержащие органические соединения, гидролизуясь и в конечном итоге окисляясь до воды и углекислоты, высвобождают азот в виде аммиака, который немедленно связывается серной кислотой. Таким образом, в растворе находятся зольные элементы и азот в форме сернокислого аммония и аммонийной соли хлорной кислоты.
Азот определяют микрометодом Кьельдаля, фосфор - колориметрически, калий - на пламенном фотометре.
Следует отметить, что при добавлении избытка хлорной кислоты в процессе озоления происходят значительные (до 50%) потери азота.
Ход анализа. При помощи конической пробирки берут пробу массой около 0,2 г тонкоизмельченного растительного материала на аналитических весах (с точностью до 0,0002 г) и помещают в колбу Кьельдаля. Результаты взвешивания записывают в соответствующие графы журнала. По разности между первым взвешиванием пробирки с растительным материалом и вторым взвешиванием пустой пробирки (после помещения пробы в колбу) находят точную массу навески анализируемого вещества.
Навески в колбах Кьельдаля заливают смесью серной и хлорной кислот в объеме 5,5 см3 (соотношение 10 : 1) и тщательно перемешивают осторожным встряхиванием и круговым вращением содержимого колбы. Затем колбы оставляют в штативах для обугливания растительного материала на ночь (минимальное время обугливания 1-1,5 ч). После этого колбы устанавливают в приспособление для озоления и нагревают на слабом огне до образования однородной коричнево-бурой кашицы.
Температуру озоления повышают до слабого кипения раствора и продолжают озоление до полного обесцвечивания, которое наступает через 25-30 мин. Если раствор в колбе продолжает оставаться окрашенным в желтый или темно-бурый цвет, то добавляют по 1-2 капли хлорной кислоты и продолжают нагревание. Нельзя создавать большой избыток хлорной кислоты в колбе, так как в этом случае происходит потеря азота. Параллельно проводят контрольное озоление исходных реактивов без растительной пробы в аналогичном режиме.
После окончания озоления колбы Кьельдаля охлаждают, затем в них добавляют по 3-5 см3 дистиллированной воды и после перемешивания содержимого снова охлаждают (можно под струей холодной воды). Охлажденный раствор из колбы Кьельдаля при помощи воронки и стеклянной палочки количественно переносят в мерную колбу объемом 100 см3 (колба № 1). Колбу Кьельдаля многократно споласкивают небольшими (по 5-10 см3) порциями дистиллированной воды из промывалки, сливая промывные воды в мерную колбу. После охлаждения объем в мерной колбе доводят дистиллированной водой до метки и после тщательного перемешивания приступают к анализу озоленного образца.
