Определение форм фосфорных соединений в растениях (часть 3)

Определение минерального фосфора. Из колбы № 1 берут 5 см3 исходного экстракта, переносят в мерную колбу объемом 100 см3, добавляют 40-50 см3 дистиллированной воды, 3-4 капли индикатора бета-динитрофенола и нейтрализуют содержимое колбы 10%-ным раствором NaOH.
Затем доводят дистиллированной водой объем в колбах примерно до 85 см3, добавляют 4 см3 раствора молибденовокислого аммония в серной кислоте, 3-4 капли хлористого олова и доводят дистиллированной водой до метки. После перемешивания содержимого колб через 5-7 мин измеряют оптическую плотность.
По разности между результатами определения общего кислоторастворимого и минерального фосфора находят содержание фосфора сахарофосфатов.
Определение липидного фосфора. Остаток в центрифужных пробирках (после удаления кислорастворимой фракции) заливают 20 см3 смеси этилового спирта и эфира (в соотношении 1 : 3), тщательно разбивают стеклянной палочкой, закрывают пробкой и оставляют на ночь при комнатной температуре. На следующий день содержимое пробирки несколько раз встряхивают от руки и центрифугируют в течение 10 мин при 3 тыс. оборотов в минуту. Надосадочную жидкость сливают в колбу Кьельдаля, а осадок в центрифужной пробирке снова заливают 20 см3 смеси спирта с эфиром, разбивают стеклянной палочкой, закрывают пробкой и оставляют на 5-6 ч при комнатной температуре, затем энергично встряхивают от руки и центрифугируют.
Надосадочную жидкость сливают в колбу Кьельдаля. Осадок в центрифужной пробирке опять заливают 20 см3 смеси спирта с эфиром, разбивают палочкой и оставляют на Ночь. Затем центрифугируют и центрифугат собирают в ту же колбу Кьельдаля. Осадок в центрифужной пробирке заливают 10 см3 дистиллированной воды, разбивают палочкой и после энергичного встряхивания центрифугируют и экстракт сливают в ту же колбу Кьельдаля.
Содержимое колбы Кьельдаля (фракция липидного фосфора) выпаривают на водяной электрической бане почти досуха, а затем в колбу Кьельдаля добавляют 5 см3 смеси серной и хлорной кислот и озоляют до полного обесцвечивания. Озоленный раствор количественно переносят в мерную колбу объемом 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки и после перемешивания берут 20 см3 раствора, переносят в другую мерную колбу объемом 100 см3, добавляют три капли индикатора бета-динитрофенола, 20-40 см3 дистиллированной воды и нейтрализуют 10%-ным раствором едкого натра. Далее в раствор добавляют все необходимые реактивы для определения фосфора и измеряют оптическую Плотность на фотоэлектроколориметре.
По оптической плотности рассчитывают содержание фосфора липидов.