Определение провитамина А (часть 1)
Каротин (общая формула С40Н56) относится к большой группе каротиноидов - желтых и оранжево-красных пигментов, которые синтезируются в растениях. В организме животных и человека каротин гидролизуется с образованием витамина А. Наибольшей биологической активностью обладает β-каротин, α- и у-каротины обладают меньшей активностью. При недостатке витамина А у человека и животных развивается ксерофтальмия.
Принцип метода. Каротин хорошо растворяется в таких органических растворителях, как ацетон, бензин, диоксан, эфир и др., и не растворяется в воде. Его экстрагируют из растений бензином и затем методом распределительной хроматографии отделяют от других красящих веществ (хлорофилла и ксантофилла) и количественно определяют это вещество на фотоэлектроколориметре по интенсивности желтой окраски путем сравнения с раствором бихромата калия, имитирующим чистый каротин.
Ход анализа. При помощи часового стекла или фарфоровой чашки берут навеску 5-10 г свежего, измельченного, растительного материала и без потерь переносят в фарфоровую ступку; быстро растирают анализируемое вещество с небольшим количеством кварцевого песка.
Каротин распадается в кислой среде, поэтому в ступку прибавляют для нейтрализации кислотности смеси и обезвоживания при мерно тройное по сравнению с навеской анализируемого вещества количество оксида кальция. После добавления оксида кальция содержимое ступки тщательно перемешивают и продолжают растирать пестиком до образования в ступке тонкого сухого порошка (добавленный оксид кальция отнимает воду и превращается в известь Са(ОН)2, а последняя частично поглощает хлорофилл и ксантофилл).
После тщательного растирания вещества ступку с содержимым оставляют в темном месте на 20-30 мин. В это время готовят хроматографическое устройство (см. рис. 39, б), состоящее из трубки Аллина и колбы Бунзена. На дно трубки Аллина помещают 2-3 стеклянные бусины и поверх них ватный тампон толщиной около 1 см. Сверху тампона насыпают слой окиси алюминия толщиной около 5 см, служащий адсорбентом хлорофилла и ксантофилла при фильтровании бензинового экстракта из растительного материала.
