Определение крахмала в растениях (часть 2)
Ход анализа. Для анализа необходимо использовать тщательно измельченный растительный материал. Зерно злаковых и бобовых культур измельчают на мельнице типа «Брабендер». Свежий материал после взятия навесок растирают в ступке или гомогенезируют в гомогенизаторе.
На весах аналитических или ВЛКТ-500-10 берут навеску картофеля 4-5 г, муки 1-1,5 г и количественно переносят смыванием ее 2 %-ной соляной кислотой в круглодонную или коническую колбу вместимостью 300-350 см3. Общее количество 2 %-ной HCl, взятой для гидролиза, должно быть 150 см3. Колбу закрывают каучуковой пробкой со вставленной стеклянной длинной трубкой, выполняющей роль обратного холодильника, и погружают на 3 ч в кипящую водяную баню. Окончание гидролиза устанавливают по отсутствию синего окрашивания гидролизуемого раствора с йодом в йодистом калии. Для проверки берут 2-3 капли гидролизата и добавляют одну каплю раствора йода.
После окончания гидролиза содержимое колбы охлаждают под краном с холодной водой, добавляют 3-4 капли метилового красного и нейтрализуют раствор в колбе 10 %-ным едким натром (NaOH), прибавляя его из пипетки или бюретки по каплям до появления желтоватой окраски раствора. Темноокрашенные гидролизаты нейтрализуют по лакмусовой бумаге, бросая кусочки ее всякий раз после прибавления щелочи.
Избыток щелочи приводит к разложению глюкозы, поэтому его удаляют прибавлением одной капли 2 %-ного раствора НСl. В нейтрализованном растворе глюкозы осаждают белки прибавлением 5-10 см3 раствора уксуснокислого свинца (до прекращения появления мути от прибавления очередной капли уксуснокислого свинца).
Раствор в колбе перемешивают и фильтруют в мерную колбу объемом 250 см3 (колба № 1).
Дистиллированной водой тщательно смывают остатки растительного материала в колбе, где проводили гидролиз, и переносят на фильтр. Осадок на фильтре промывают водой и фильтруют почти до метки. Затем объем фильтрата в колбе доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают.
Избыток уксуснокислого свинца в фильтрате мешает определению глюкозы. Для удаления его избытка берут пипеткой 50 см3 фильтрата и переносят в мерную колбу на 100 см3 (колба № 2), приливают (постепенно при перемешивании до исчезновения появления мути от последней капли) насыщенный раствор сульфата натрия (общий объем его 5-7 см3). После осаждения избытка уксуснокислого свинца объем в колбе доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Затем в обе мерные колбы (№ 1 и 2) с гидролизатами крахмала (на 250 и 100 см3) добавляют по 3-4 капли толуола или по 1-2 кристаллика тимола для консервации и, если нет возможности определить глюкозу тотчас, оставляют до следующего дня.
Затем раствор из колбы № 2 (объем 100 см3) фильтруют через двойной плотный фильтр в коническую чистую колбу или стакан. Берут пипеткой 20 см3 фильтрата и переносят в коническую колбочку или стаканчик вместимостью 150-200 см3, добавляют смесь 20 см3 раствора сульфата меди и 20 см3 щелочного раствора сегнетовой соли. Содержимое колбочки нагревают до кипения на сетке газовой горелкой и несильно кипятят в течение 3 мин. Затем отстаивают содержимое в течение 1 мин (дают возможность осесть выпавшему в осадок оксиду меди (I) Сu2О).
