Определение сырого протеина в растениях (часть 2)
Принцип метода. Растительное вещество озоляют при температуре 338°С в серной кислоте с перекисью водорода в присутствии катализатора - селена.
Выделившийся из органических соединений и связанный серной кислотой аммиак вытесняется щелочью и отгоняется паром в приемник, где связывается борной кислотой. Поглощенный борной кислотой аммиак учитывается титрованием 0,01 н. раствором серной кислоты. По количеству связанного титрованным раствором серной кислоты аммиака рассчитывают содержание азота в исследуемом растительном материале.
Результаты содержания общего азота используют для определения сырого протеина и количества небелкового азота по разности между общим и белковым азотом.
Ход анализа. На аналитических весах при помощи конической пробирки берут навеску 0,15-0,2 г воздушно-сухого тонкоизмельченного или 2-3 г свежего грубоизмельченного растительного материала и помещают в колбу Кьельдаля. Одновременно берут навеску растительного материала в тарированный стеклянный бюкс для определения гигроскопической влаги и сухого вещества.
В колбу Кьельдаля со взятой навеской исследуемого вещества приливают 5-10 см3 концентрированной серной кислоты (пл. 1,84 г/см3) с растворенном в ней селеном и, слегка перемешав содержимое колбы, оставляют для медленного взаимодействия серной кислоты и растительного вещества на 5-6 ч. Затем в колбу приливают 1-2 см3 33%-ной Н2О2, устанавливают колбу в газовую установку для озоления, нагревают до кипения и слабо кипятят до полного обесцвечивания раствора. При необходимости в процессе озоления добавляют серную кислоту и перекись водорода (по 1-2 см3).
Одновременно проводят холостое озоление серной кислоты с перекисью водорода (без растительного материала) с целью вычленения возможного загрязнения поглощенным из атмосферы аммиаком серной кислотой.
Кипячение проводят медленно, при температуре не более 338°С. При слишком/бурном кипении раствора в результате высокой температуры возможно выделение азота в молекулярной форме, который не связывается серной кислотой и улетучивается, что и приводит к неправильным искаженным результатам.
Необходимо обращать внимание на горло колбы, где нередко остаются неозоленные частички вещества вследствие их разбрызгивания. Неозоленные частички осторожно смывают небольшими порциями дистиллированной воды из промывалки обратно в колбу и продолжают озоление. Заканчивают его, когда раствор в колбе станет абсолютно прозрачным (на что расходуется 3-5 ч).
После озоления растительного материала приступают к определению азота в растворе золы одним из двух способов - микрометодом или макрометодом Кьельдаля.
