Определение сырого протеина в растениях (часть 5)
Вычисление результатов анализа. Каждый кубический сантиметр 0,01 н. серной кислоты связывает аммиак в количестве, соответствующем 0,14 мг азота. Умножая количество серной кислоты, пошедшей на титрование борной кислоты в приемнике, на поправку к титру и этот коэффициент (0,14 мг), узнаем, сколько азота содержалось в объеме раствора золы, взятом для отгона аммиака.
Содержание азота при отгоне его на микро-Кьельдале определяют по формуле
где Х - содержание азота, в %; а - количество 0,01 н. H2SО4 на титрование см3; У поправка к титру 0,01 и. H2SО4; Н - навеска воздушно-сухого растительного материала для озоления, мг; V - объем полученного раствора золы см; V1 - объем раствора золы для отгона аммиака, см3; 100 -коэффициент для перевода в проценты.
При отгоне аммиака в аппарате Кьельдаля для макроопределений формула вычислений приобретает следующий вид:
Для пересчета результатов анализа на абсолютно сухую массу растительного материала необходимо полученный результат 100 умножить на 100/(100-у) где у - содержание гигроскопической влаги, %.
Содержание сырого протеина рассчитывают умножением количества азота на коэффициент 6,25. Коэффициент 6,25 получается из следующих вычислений. Среднее содержание азота в белке составляет 16%. Следовательно, 16 г азота отвечает 100 г белка:
Коэффициент 6,25 не является постоянным для всех сельскохозяйственных культур, его величина зависит от содержания азота в белке конкретной группы растений (табл. 14).
В агрохимических исследованиях часто используется стабильный изотоп 15N. При определении азота для масс-спектрометрического анализа обогащенные стабильным изотопом 15N растительные пробы озоляют, как указано выше. Отгоняют аммиак так же, как изложено выше, - одним из методов Кьельдаля. Однако в приемник наливают 0,01 н. раствор серной кислоты, причем объем кислоты всегда берут такой, чтобы ее хватало с избытком для поглощения выделяющегося аммиака при его отгоне. Избыток, не связанной титрованной серной кислоты, оттитровывают точно 0.01 н. раствором NaOH. Тогда формула для вычислений принимает вид
где V - объем 0,01 и. H2SO4 в приемнике, см3; V1 - объем 0,01 н, NaOH на титрование свободной серной кислоты в приемнике, см3; Т2 - поправка к титру 0,01 н. NaOH.
Реактивы: 1) серная кислота х. ч. пл. 1,84, содержащая селен, - 5 г металлического селена растворяют в 1 дм3 серной кислоты пл. 1,84 при нагревании, смесь используется для озоления;
2) пергидроль (Н2О2) 33%-ная;
3) 40%-ная щелочь;
4) 4%-ный раствор борной кислоты - 40 г борной кислоты х. ч. растворяют 150-200 см3 дистиллированной водой в химическом стакане при нагревании. Охлажденный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1 дм3, приливают 10 см3 комбинированного индикатора Гроака и доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают;
5) комбинированный индикатор Гроака;
6) 0,01 н. серная кислота х. ч.;
7) реактив Несслера;
8) 0,01 н. NaOH х. ч.
