Определение провитамина А (часть 2)
Для равномерного уплотнения окиси алюминия в момент наполнения колонки необходимо слегка постукивать деревянной или стеклянной палочкой об стенки трубки Аллина. Укрепляют ее посредством каучуковой пробки в колбе Бунзена и подключают к вакуумному насосу. Затем из ступки в хроматографическую колонку без потерь переносят сухой порошок растительного вещества. Ступку несколько раз ополаскивают небольшими количествами бензина, сливая жидкость в колонку.
Включают вакуумный насос и при слабом разрежении фильтруют (скорость фильтрации около 60 капель в минуту), постоянно добавляя небольшие порции бензина в колонку до тех пор, пока вытекающий в колбу Бунзена фильтрат перестанет быть окрашенным в желтый цвет. Постоянно необходимо следить, чтобы над поверхностью окиси алюминия все время был слой бензина во избежание окисления каротина кислородом воздуха. Всю работу с бензином по возможности необходимо проводить в вытяжном шкафу.
Закончив хроматографическое отделение каротина от сопутствующих пигментов, измеряют мерным цилиндром объем раствора, собранного в колбе Бунзена (предварительно тщательно перемешивают, встряхивая) и приступают к определению содержания каротина.
Содержание каротина определяют на фотоэлектроколориметре при синем светофильтре (длина волны 420 нм). В качестве стандартного раствора служит двухромовокислый калий, 1 мл которого отвечает по окраске 0,00416 мг каротина.
Вычисление результатов. Количество каротина (в мг на 100 г свежего растительного материала) вычисляют по следующей формуле:
где V - объем бензинового экстракта, см3; Н - навеска исследуемого вещества, г; D1 - оптическая плотность исследуемого раствора; D2 - оптическая плотность стандарта; 0,00416 - количество каротина в 1 см3, которому соответствует стандартный раствор двухромовокислого калия, см3.
Реактивы: 1) бензин авиационный. Автомобильный бензин перегоняют, отбирая фракцию, кипящую при 60-100°С. Бензин можно заменить петролейным эфиром;
2) окись кальция;
3) окись алюминия просеивают через сито с отверстиями 0,25 мм;
4) двухромовокислый калий. Для приготовления стандартногс раствора его берут на аналитических весах 0,7200 г и растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды. Оптическая плотность раствор бихромата калия соответствует содержанию 0,00416 мг каротинг в 1 см3.
