Определение сырого протеина в растениях (часть 4)
В мерный цилиндр наливают 40-60 см3 40%-ного раствора NaOH или КОН (количество раствора щелочи должно в 4 раза превышать количество концентрированной H2SО4, взятой для озоления навески растительного материала). Не расплескивая, осторожно тонкой струей приливают щелочь из цилиндра. Моментально, как только вся щелочь вылита, вставляют пробку в горло и уплотняют ее несильным нажатием в горле колбы. Следует иметь в виду, что щелочью нельзя заливать то место горла колбы, где располагается пробка. В противном случае пробка (при попадании щелочи на нее или на то место, где она крепится) начинает скользить и выскакивает при кипячении.
После укрепления пробки в горле колбы содержимое ее осторожно перемешивают. Жидкость в колбе от индикатора фенолфталеина окрашивается в красно-фиолетовый цвет, который указывает на то, что количество щелочи прилито достаточно, следовательно, реакция среды в колбе щелочная; можно начинать отгон аммиака.
После того как все места прибора будут заполнены подготовленными для анализа приемниками и отгонными колбами, пускают воду в холодильник, зажигают газ в горелках аппарата, доводят растворы в отгонных колбах до кипения и поддерживают медленное кипение в колбах, регулируя пламя газовых горелок.
Слишком интенсивное кипение опасно выбросом содержимого отгонной колбы через каплеуловитель и холодильник в приемник. Это приводит к потере озоленной растительной пробы и загрязнению секции аппарата щелочью и, следовательно, требует длительной промывки сначала кипящей подкисленной водой, а затем водой без кислоты и паром.
Недопустимо также неравномерное кипение раствора в отгонной колбе. Если сначала раствор кипит бурно, то затем при резком снижении интенсивности кипения происходит засасывание борной кислоты из приемника и переброс ее в отгонную колбу, что также приводит к искажению результатов анализа. Для предохранения переброса кислоты из приемника в отгонную колбу в случае засасывания на конце холодильника при помощи каучуковой трубки укрепляют шариковое расширение, которое является продолжением холодильника.
Таким образом, необходимо следить за интенсивностью кипения и поддерживать его на уровне спокойного и непрерывного. Через 5-6 мин после того, как раствор борной кислоты в приемнике окрасится в ярко-зеленый цвет, приемную колбу опускают ниже с таким расчетом, чтобы конец холодильника постоянно находился над жидкостью приемника с борной кислотой и продолжают отгон еще в течение 20-30 мин. По окончании отгона конец трубки холодильника из промывалки споласкивают дистиллированной водой в приемник и содержимое приемника титруют 0,01 н. раствором серной кислоты до перехода ярко-зеленой окраски в красно-фиолетовую.
