Определение белкового азота в растениях (часть 3)
Отсутствие мути после добавления ВаСl2 к небольшой порции вытекающего фильтрата указывает на то, что все небелковые азотсодержащие соединения отмыты из осадка белка, так как они имеют одинаковую подвижность с ионами сульфата, отсутствие которого и указывает на полноту отмывания.
Затем дают возможность полного протекания раствора над осадком на фильтре, и фильтр с осадком вместе с воронкой просушивают в термостате при температуре 50-60°С до тех пор, пока бумага не станет легко сниматься с воронки (1-2 ч). Фильтр сворачивают в виде сигары и, не теряя осадка белка, опускают в колбу Кьельдаля для сжигания. В колбу Кьельдаля приливают из цилиндра или дозатора 10-15 см3 концентрированной серной кислоты с растворенным селеном и осторожно перемешивают содержимое, стараясь смочить серной кислотой (не расплескивая) весь фильтр и осадок белка, и затем оставляют на 5-6 ч для медленного взаимодействия кислоты и осадка.
Затем в колбу Кьельдаля приливают 1-2 см3 30%-ного пергидроля, устанавливают колбу на газовую установку под тягой и озоляют при медленном кипении. При необходимости в процессе озоления добавляют в колбу по 1-2 см3 серной кислоты и пергидроля. Озоление ведут до абсолютного осветления раствора в колбе Кьельдаля. После этого колбу остужают, осторожно приливают в нее 3-5 см3 дистиллированной воды из промывалки, раствор перемешивают и снова охлаждают. Раствор золы из колбы Кьельдаля количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3.
Отгон аммиака проводят на аппарате Кьельдаля для микроопределений, используя в приемнике раствор борной кислоты. Титруют содержимое приемника 0,01 н. раствором H2SO4.
Вычисление результатов анализа проводят по формуле.
Для перерасчета результатов анализа на абсолютно сухую массу растительного вещества содержание белкового азота умножают на 100/(100-у) (у - содержание гигроскопической влаги в %).
Содержание белка вычисляют умножением содержания белкового азота (в %) на коэффициент 6,25 или на соответствующий данному растению.
Реактивы: 1) раствор медного купороса. 60 г сернокислой меди CuSО4•5H2О растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды;
2) раствор NaOH - 12,5 г гидроксида натрия NaOH растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды;
3) серная кислота с селеном - в 1 дм3 серной кислоты H2SО4 пл. 1,84 растворяют при нагревании 5 г металлического селена;
4) 33 %-ная Н2О2;
5) 0,01 н. раствор серной кислоты;
6) 4%-ный раствор Н3ВО3;
7) хлористый барий, 10 %-ный раствор;
8) комбинированный индикатор.
